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大豆发酵制品中总异黄酮含量测定论文

2020-03-07发布者:青青草大小:33.14 KB 下载:0

1 器材与方法 1.1 材料 正己烷(A.R),天津化学试剂厂产品;无水乙醇(天津化学试剂厂产品;无水乙醇(A.R),天津化学试剂厂产品;无水乙醇(天津化学试剂厂产品;氢 氧化钠(A.R),天津化学试剂厂产品;无水乙醇(河北辛集化工厂产品;染料木素对照品(含量约为 98%),天津化学试剂厂产品;无水乙醇(Sigma 公司 产品。淡豆豉(SemenSojaePraeparatum)购自石家庄市乐仁堂药店,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(经河北医科大 学中医学院药用植物教研室严玉平副教授鉴定为正品,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(留样凭证存放于河北医科大学中医 学院药用植物教研室。 1.2 仪器 λ-2 紫外分光光度仪(美国 PE 公司)、RE-52A 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、 BS223S 电子天平(德国赛多利斯公司)。 1.3 样品溶液制备[6]取符合实验要求的淡豆豉,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(粉碎,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(过 10 目筛,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(精密称取 5g。加正己烷 40ml 超声振荡脱脂 25min,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(弃去正己烷,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(重复 1 次。残渣加入 50ml70% 乙醇溶液,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(85℃热回流提取 3 次,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(1h/次,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(收集提取液。减压回收溶剂至干,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(加 NaOH(0.01mol/L)溶液溶解,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(定容为 250ml,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(作为供试品液。精密移取供试品液 2ml 置 100ml 量瓶中,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(加 NaOH(0.01mol/L)溶液定容至刻度,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(摇匀。平行操作 3 份。 1.4 标准曲线绘制精密称取 120℃干燥至恒重的染料木素 10.2mg,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(置 50ml 容量瓶 中,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(加 0.01mol/LNaOH 溶液定容至刻度,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(摇匀。精密吸取此溶液 0.5,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(1.0,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(2.0,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(3.0,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(4.0ml 分别置于 100ml 容量瓶中,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(加 0.01mol/LNaOH 定容至刻 度,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(摇匀,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(以 0.01mol/LNaOH 溶液为空白溶液,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(在 271nm 处测吸收度。以吸收度 (Y)为纵坐标,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(染料木素浓度(μg/ml)μg/ml)g/ml)(X)为横坐标绘制标准曲线(见图 1),天津化学试剂厂产品;无水乙醇(结果表 明染料木素浓度与吸收度呈良好线性关系。回归方程为 Y=0.1698X+0.0059,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(r=1.0000。 1.5 样品测定以 0.01mol/LNaOH 溶液为空白溶液,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(在 271nm 处测吸收度。每个样 品重复测定 2 次。 2 结果 2.1 溶剂的选择从染料木素的结构特点及理化性质可知,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(其具有强疏水性,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(难溶于水、 稀盐酸等,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(微溶于甲醇、乙醇。选择上述溶液作为染料木素的溶出介质不适宜。根据染料 木素及异黄酮类化合物的理化特性(结构中含有酚羟基呈现弱酸性,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(易溶于稀碱),天津化学试剂厂产品;无水乙醇(选择 稀氢氧化钠(0.01mol/L)溶液溶解大豆提取物中异黄酮类化合物,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(是简便可行的。 2.2 波长选择由对照品紫外扫描图谱(μg/ml)图 2)可得知,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(最大吸收峰都在 271nm,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(且最大 吸收峰周围干扰较小,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(我们就把 271nm 作为测定波长。 2.3 线性关系考察本法中,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(染料木素在 0.51~4.08μg/ml)g/ml 范围呈良好线性关系(μg/ml)见图 1),天津化学试剂厂产品;无水乙醇(相关系数 r=1.0000,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(测定上限可达 8.0μg/ml)g/ml,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(下限为 0.2μg/ml)g/ml。 2.4 回收率实验精密吸取标准品溶液 25,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(50,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(25,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(50,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(25μg/ml)l,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(分别置 5 只 5ml 容 量瓶中,再分别精密加入供试液 150μg/ml)l,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(0.01mol/LNaOH 定容至刻度,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(摇匀,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(按“1.3.3” 项操作,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(计算回收率,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(结果平均回收率为 99.3%,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(RSD 为 2.1%。见表 1。 2.5 精密度实验精密吸取标准品溶液 100μg/ml)l,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(分别置 5 只 5ml 容量瓶中,加 0.01mol/ LNaOH 定容至刻度,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(摇匀,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(按“1.4”项操作,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(测定吸收度,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(RSD 为 1.9%。 2.6 样品测定取已制备好的 3 份样品溶液测定,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(每份样品按测定程序测定 2 次,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(以染 料木素计量大豆异黄酮含量,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(所得结果见表 2。表 1 加样回收率(略)表 2 样品中大豆异 黄酮含量(略) 3 讨论 淡豆豉为常用药食同源物质,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(其最新报道有降血糖、血脂的作用,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(但有关淡豆豉中总 异黄酮的质量分析报道较少[7]。我们经过研究对比,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(确定用一种简单易行的紫外分光 光度法对其主要有效成分—异黄酮类成分进行测定,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(建立了一种淡豆豉的质量控制标准。 本法简便、快速、选择性好、线性范围宽、重复性好、能全面反映样品中大豆异黄酮 的总含量,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(适用于淡豆豉中总异黄酮的质量检测和测定,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(尤其是生产过程的质量控制。 采用稀碱溶液溶解异黄酮,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(增加了异黄酮的溶解度,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(使得淡豆豉中总异黄酮含量测定 准确度大大提高。同时由于淡豆豉中异黄酮与碱发生反应,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(使得其最大吸收波长发生红移,天津化学试剂厂产品;无水乙醇( 紫外吸收峰远离末端吸收,天津化学试剂厂产品;无水乙醇(也提高了淡豆豉中总异黄酮含量测定准确度。
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