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妇科养坤丸质量标准探究论文

2020-03-07发布者:青青草大小:38.18 KB 下载:0

1 器材 1.1 仪器 DionexSummit 高效液相色谱仪(P680HPLCPump,ASI-P680HPLCPump,ASI100AutomatedSampledInjector,PDA100PhtodiodeArrayDetecter,STH585ColumnOven)ChromeleonChromeleon 数据处理系统; 赛多利斯万分之一电子天平(德国);电子数控式恒温水浴锅(江苏昆山医用设备厂); 硅胶 G,硅胶 GF254(青岛海洋化工厂生产)。 1.2 样品与试药 妇科养坤丸:自制(P680HPLCPump,ASI-批号 050825,050903,050920)Chromeleon;去氢木香内酯对照品(供薄 层鉴别用,批号 111525-200404);延胡索乙素对照品(供薄层鉴别用,批号 110726-200409);甘草次酸对照品(供薄层鉴别用,批号 110723-200411),黄芩 苷对照品(供含量测定用,批号 110715-200514)均由中国药品生物制品检定所提供; 甲醇为色谱纯;水为超纯水,其他化学试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 薄层鉴别 2.1.1 黄芩的薄层鉴别取本品 11g,研细,加醋酸乙酯-甲醇(3∶1)30ml,回流 30min,滤过,蒸干,加 5ml 甲醇,取上清液作为供试品溶液。取去黄芩的模拟处方,按 供试品溶液的制备方法,依法制备阴性对照品溶液。取黄芩苷对照品,加甲醇制成每毫升 含 1mg 的溶液,作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各 6μll,分别点于同一硅胶 G 薄层 板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水-甲醇(5∶3∶0.6∶1.5∶0.8)为展开剂,展开,取出,晾干, 喷以三氯化铁试液,日光下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同 颜色的斑点。阴性对照无干扰。结果见图 1。 2.1.2 木香的薄层鉴别取本品 6g,研细,加氯仿 10ml,超声处理 30min,滤过,滤 液作为供试品溶液。取去木香的模拟处方,按供试品溶液的制备方法,依法制备阴性对照 品溶液。取去氢木香内酯对照品,分别加氯仿制成每毫升含 0.5mg 的溶液,作为对照品 溶液。吸取供试品溶液和对照品溶液各 5μll,分别点于同一羧甲基纤维钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上,以石油醚-乙醚(5∶3.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 1%香醛硫酸 溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色 的斑点。阴性对照无干扰。结果见图 2。 2.1.3 延胡索的薄层鉴别取本品 11g,研细,加甲醇 50ml,超声处理 30min,滤过, 滤液蒸干,残渣加水 10ml 溶解,加浓氨试液调至碱性(pH9~10),用乙醚提取 3 次, 10ml/次,合并乙醚液,用稀硫酸溶液提取 3 次,10ml/次,合并稀硫酸液,加氢氧化钠 试液调至碱性(pH11~12),再用乙醚提取 3 次,10ml/次,合并乙醚液,蒸干,残渣 加甲醇 1ml 使溶解,作为供试品溶液。取去延胡索的模拟处方,按供试品溶液的制备方法, 依法制备阴性对照品溶液。取延胡索乙素对照品,加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液,作 为对照品溶液。吸取供试品溶液与阴性对照溶液各 10μll,对照品溶液 2μll,分别点于同一 以羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶 G 薄层板上,以苯-醋酸乙酯-甲醇-正丁醇-浓氨水 (6∶3∶1.5∶1.5∶0.8)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供 试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的暗黄色荧光斑点。阴性对照无干扰。 结果见图 3。 2.1.4 甘草的薄层鉴别取本品水蜜丸 11g,研细,或大蜜丸 18g,剪碎,加硅藻土 12g,研匀,加乙醚 60ml,加热回流 1h,滤过,药渣加甲醇 40ml,加热回流 1h,滤过, 滤液蒸干,残渣加水 40ml 使溶解,用正丁醇提取 3 次,20ml/次,合并正丁醇液,用水 洗涤 3 次,蒸干,残渣加入盐酸 5ml,再加氯仿 50ml 超声提取 30min,滤过,取氯仿提 取液,蒸干,残渣加甲醇 2ml 溶解,作为供试品溶液。取甘草次酸对照品,加甲醇制成每 毫升含 2mg 的溶液,作为对照品溶液。取缺甘草的其它药材制成的蜜丸 18g,同法制成 阴性对照溶液。照薄层色谱法[1]试验,吸取上述三种溶液各 1~2μll,分别点于同一羧 甲基纤维钠为黏合剂的硅胶 GF254 薄层板上,以石油醚-醋酸乙酯-冰醋酸(25∶9∶0.5)为 展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品 色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。结果见图 4。 2.2 黄芩苷的含量测定 2.2.1 色谱条件与系统适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,色谱柱为 AgillentC18(P680HPLCPump,ASI-250mm×4.6mm,5μlm)Chromeleon;流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(P680HPLCPump,ASI-47:53)Chromeleon;检 测波长为 280nm;流速 1.0ml·min-1;柱温 25℃。理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低 于 2500。 2.2.2 对照品溶液的制备精密称取在 60℃减压干燥 4h 的黄芩苷对照品适量,加甲醇 制成每毫升含 60μlg 的溶液,即得。 2.2.3 供试品溶液的制备取本品 10g,研碎,取约 0.5g,精密称定,置 100ml 锥形 瓶中,加 70%乙醇 50ml,精密称定,超声提取(150W,35kHz)30min,放冷,精密 称定,以 70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 2.2.4 专属性实验按处方比例和工艺,同法制成全方缺黄芩的的阴性对照液,按样品 供试液的制备方法制备,测定。表明:在与黄芩苷对照品色谱的相应位置上无干扰峰出现, 说明方中其它成分对测定结果无影响。黄芩苷对照品、供试品和阴性对照品的 HPLC 图谱 见图 5。 2.2.5 线性关系考察取黄芩苷对照品溶液(0.060mg/ml)自动进样 1,5,10,15,20,25μll,按上述色谱条件设定峰面积,以峰面积(Y,mAu*sec)对 进样量(X,μlg)进行线性回归,得回归方程为 Y=2220.2X-0.6294,r=0.9999;表明 黄芩苷在 0.0576~1.44μlg 内线性关系良好。 2.2.6 精密度实验取黄芩苷对照品溶液(0.060mg/ml),重复进样 6 次,10μll/次, 按上述条件测得峰面积,RSD=0.36%,表明精密度符合要求。 2.2.7 稳定性实验取对照品溶液和供试品溶液分别于 0,2,4,8 及 12h,各自动进 样 6μll,按上述色谱条件测定峰面积,对照品溶液和供试品溶液的 RSD 分别为 0.87%,1.14%。表明 12h 内对照品和供试品均稳定。 2.2.8 重复性实验按上述的含量测定方法,对同一批样品(批号:050825)制备供 试液,平行做 5 份,测得峰面积,计算含量,结果 RSD=1.18%,表明重复性良好。 2.2.9 加样回收率实验精密称取已知含量的同一批样品(P680HPLCPump,ASI-批号 050825)Chromeleon6 份,精密加入 对照品适量,挥干溶剂,按供试品溶液制备项下操作。按色谱条件测定峰面积,计算回收 率。结果见表 1。表 1 加样回收率实验结果(略) 2.2.10 样品的测定取 3 批样品按含量测定项下的方法提取、测定并计算含量,每份样 品测定 3 次取均值。结果见表 2。表 2 样品测定结果(略) 3 讨论[2,3] 黄芩苷为多酚羟基黄酮苷类化合物,采用 70%回流提取转移率较高,但杂质较多,经 比较,结果表明采用醋酸乙酯-甲醇(3∶1)回流提取,可显著减少水溶性杂质的溶出;提 取样品含有较多脂溶性成分,在薄层上容易过载形成拖尾,影响鉴别,经实验,蒸干提取 溶剂后的残渣采用乙醚振摇提取可很好的去除大部分杂质,黄芩苷基本无损失,乙醚不溶 部分采用甲醇溶解,可获得较好的重复性。甘草中甘草酸的稳定性较差,研究采用将甘草 酸水解成甘草次酸进行鉴别,可获得较好的重复性。 本品中黄芩仅占全方药材不足 10%,因此理论溶媒用量较《中国药典》为大;采用甲 醇或乙醇提取可显著降低杂质提取量,有利于保护色谱柱,故本次实验分别对 70%乙醇、 无水乙醇、甲醇等提取溶媒的超声提取 30min,1,2h 和回流提取 2,3,4h 进行了考察, 结果显示采用 70%乙醇超声 30min 提取效果最好,操作简单、快速。
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